很多求助細胞的小伙伴培養(yǎng)細胞時間都不長，部分小伙伴甚至沒有經(jīng)過系統(tǒng)的培訓(xùn)，僅靠課本知識和少量的指導(dǎo)就開始嘗試細胞培養(yǎng)，在學(xué)習過程中難免走不少彎路，常見的便是細胞污染。現(xiàn)在就如何防治細胞污染做個介紹，希望能幫到各位小伙伴。

　　無論新人還是熟手，細胞污染都是必須要面對的，那對于細胞污染，預(yù)防為主，因為細胞一旦污染，想救是非常困難的，污染嚴重的話即便救活，細胞狀態(tài)也會差很多。所以先來說下怎么預(yù)防細胞污染的。

　　生物安全柜是處理細胞的主要場所，也是細胞發(fā)生污染的主要場所，所以安全柜的正確使用是預(yù)防細胞污染的步。那么安全柜內(nèi)需要注意的小細節(jié)有哪些呢？

　　首先，所有進入安全柜的東西在進入前都要用75%的酒精消毒。特別要注意的是我們的手，只要出了安全柜，再進入安全柜前都要噴75%的酒精消毒。實驗耗材盡量放置在合適的容器內(nèi)用報紙包好后滅菌，如槍頭插入槍頭盒，其他不規(guī)則的耗材可放入鋁制飯盒內(nèi)。槍頭插入槍頭盒時要帶手套，因為滅菌可能無法去除槍頭上可能粘附的油脂或其他雜質(zhì)。

　　其次，安全柜內(nèi)的東西要擺放有序，這個可以根據(jù)個人使用習慣而定（如果小伙伴使用的是公用安全柜，則可能需要使用前臨時調(diào)整）。

　　再次，由于使用安全柜的過程中手和前臂都是要進入安全柜的，所以有條件的小伙伴應(yīng)該準備至少一件細胞房連體潔凈服（裝入布袋消毒后烘干，在細胞房中取出，非更換前不得穿出細胞房），沒有條件的小伙伴則至少準備一副套袖，每次用完后放安全柜中紫外消毒。

　　細胞培養(yǎng)離不開各種試劑，諸如培養(yǎng)基、血清等，所以預(yù)防細胞污染的第二步就是正確處理和使用這些試劑。如果實驗室條件允許，那么保險的莫過于直接都買商業(yè)化試劑，例如比較的Gibco、Hyclone等，這些品牌的試劑只要是，品質(zhì)都沒有問題。當然對于一些學(xué)校，特別是條件相對艱苦的實驗室，可能需要自己買干粉配制，那么在試劑配制中的無菌操作就格外重要。另外建議每次試劑配制量不宜過多，比如培養(yǎng)基以1-2周內(nèi)用完為宜，另分裝成小瓶時可考慮再用針頭濾器過濾一次，減少細菌污染的可能性。

　　在準備工作一切就緒后，細胞的處理過程也是大家需要注意的。細胞處理前應(yīng)將當次實驗需要的各種試劑、耗材準備齊備，盡量減少細胞處理過程中的來回走動。安全柜使用前紫外照射30min滅菌，然后通風5min保證換氣到位。實驗過程中，所有試劑不用就蓋上瓶蓋，如果需要打開瓶蓋，則除了干凈的槍頭，其他任何東西都不要從瓶口的正上方經(jīng)過，防止試劑污染。細胞培養(yǎng)若使用培養(yǎng)皿，則好不要長時間打開皿蓋。另外移液器也是細胞污染的一個隱藏途徑，特別是使用無濾芯槍頭的小伙伴，在吸取試劑時，很容易不小心將試劑倒吸入移液器，如果發(fā)生這種情況，要及時用酒精棉球擦去倒吸的試劑，特別是培養(yǎng)基，極易成為細菌生長的溫床。一把污染的移液器可以輕松污染小伙伴的所有細胞，甚至整個實驗室的細胞，所以友情推薦有條件的小伙伴在處理細胞時一定要使用帶濾芯的槍頭。當然即便是使用帶濾芯的槍頭，也要盡量避免試劑倒吸，因為想要*去除倒吸入移液器的試劑非常困難。

　　培養(yǎng)箱作為細胞培養(yǎng)的場所，也需要小伙伴留心。由于培養(yǎng)箱內(nèi)的溫度和濕度很高，是很適宜細菌生長的，所以如果有條件（實驗室有2個或以上培養(yǎng)箱），好定期用75%酒精擦拭培養(yǎng)箱，及時定期更換培養(yǎng)箱內(nèi)水槽。

　　那么細胞如果還是不幸污染了，那又該怎么辦呢？我把細胞污染分為早期和晚期兩種。早期污染是細胞狀態(tài)變差，但依舊能保持生長，顯微鏡下（光鏡）不可見明顯微生物或可見少量微生物，這時候我們在換液時建議多用PBS洗幾次，然后用雙抗原液侵潤細胞1-2min，吸去，再加入正常培養(yǎng)基。早期污染只要發(fā)現(xiàn)及時，處理得當，救回來的可能性還是很大的。晚期污染則是細胞形態(tài)發(fā)生明顯改變，細胞停止生長，顯微鏡下可見明顯微生物。這時候我建議大家及時清理掉相關(guān)細胞，以免污染其他細胞，重新復(fù)蘇更早批次的細胞。所以大家會發(fā)現(xiàn)，新細胞收到后，不應(yīng)急于開展實驗，而應(yīng)該先小心培養(yǎng)，凍存1到2個批次的早期細胞，然后再開展實驗，這樣實驗細胞一旦出現(xiàn)問題，可以有庫存細胞保證實驗還能繼續(xù)進行。