很多求助細(xì)胞的小伙伴培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)間都不長(zhǎng)，部分小伙伴甚至沒(méi)有經(jīng)過(guò)系統(tǒng)的培訓(xùn)，僅靠課本知識(shí)和少量的指導(dǎo)就開(kāi)始嘗試細(xì)胞培養(yǎng)，在學(xué)習(xí)過(guò)程中難免走不少?gòu)澛罚Ｒ?jiàn)的便是細(xì)胞污染。現(xiàn)在就如何防治細(xì)胞污染做個(gè)介紹，希望能幫到各位小伙伴。

　　無(wú)論新人還是熟手，細(xì)胞污染都是必須要面對(duì)的，那對(duì)于細(xì)胞污染，預(yù)防為主，因?yàn)榧?xì)胞一旦污染，想救是非常困難的，污染嚴(yán)重的話即便救活，細(xì)胞狀態(tài)也會(huì)差很多。所以先來(lái)說(shuō)下怎么預(yù)防細(xì)胞污染的。

　　生物安全柜是處理細(xì)胞的主要場(chǎng)所，也是細(xì)胞發(fā)生污染的主要場(chǎng)所，所以安全柜的正確使用是預(yù)防細(xì)胞污染的步。那么安全柜內(nèi)需要注意的小細(xì)節(jié)有哪些呢？

　　首先，所有進(jìn)入安全柜的東西在進(jìn)入前都要用75%的酒精消毒。特別要注意的是我們的手，只要出了安全柜，再進(jìn)入安全柜前都要噴75%的酒精消毒。實(shí)驗(yàn)耗材盡量放置在合適的容器內(nèi)用報(bào)紙包好后滅菌，如槍頭插入槍頭盒，其他不規(guī)則的耗材可放入鋁制飯盒內(nèi)。槍頭插入槍頭盒時(shí)要帶手套，因?yàn)闇缇赡軣o(wú)法去除槍頭上可能粘附的油脂或其他雜質(zhì)。

　　其次，安全柜內(nèi)的東西要擺放有序，這個(gè)可以根據(jù)個(gè)人使用習(xí)慣而定（如果小伙伴使用的是公用安全柜，則可能需要使用前臨時(shí)調(diào)整）。

　　再次，由于使用安全柜的過(guò)程中手和前臂都是要進(jìn)入安全柜的，所以有條件的小伙伴應(yīng)該準(zhǔn)備至少一件細(xì)胞房連體潔凈服（裝入布袋消毒后烘干，在細(xì)胞房中取出，非更換前不得穿出細(xì)胞房），沒(méi)有條件的小伙伴則至少準(zhǔn)備一副套袖，每次用完后放安全柜中紫外消毒。

　　細(xì)胞培養(yǎng)離不開(kāi)各種試劑，諸如培養(yǎng)基、血清等，所以預(yù)防細(xì)胞污染的第二步就是正確處理和使用這些試劑。如果實(shí)驗(yàn)室條件允許，那么保險(xiǎn)的莫過(guò)于直接都買商業(yè)化試劑，例如比較的Gibco、Hyclone等，這些品牌的試劑只要是，品質(zhì)都沒(méi)有問(wèn)題。當(dāng)然對(duì)于一些學(xué)校，特別是條件相對(duì)艱苦的實(shí)驗(yàn)室，可能需要自己買干粉配制，那么在試劑配制中的無(wú)菌操作就格外重要。另外建議每次試劑配制量不宜過(guò)多，比如培養(yǎng)基以1-2周內(nèi)用完為宜，另分裝成小瓶時(shí)可考慮再用針頭濾器過(guò)濾一次，減少細(xì)菌污染的可能性。

　　在準(zhǔn)備工作一切就緒后，細(xì)胞的處理過(guò)程也是大家需要注意的。細(xì)胞處理前應(yīng)將當(dāng)次實(shí)驗(yàn)需要的各種試劑、耗材準(zhǔn)備齊備，盡量減少細(xì)胞處理過(guò)程中的來(lái)回走動(dòng)。安全柜使用前紫外照射30min滅菌，然后通風(fēng)5min保證換氣到位。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，所有試劑不用就蓋上瓶蓋，如果需要打開(kāi)瓶蓋，則除了干凈的槍頭，其他任何東西都不要從瓶口的正上方經(jīng)過(guò)，防止試劑污染。細(xì)胞培養(yǎng)若使用培養(yǎng)皿，則好不要長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)皿蓋。另外移液器也是細(xì)胞污染的一個(gè)隱藏途徑，特別是使用無(wú)濾芯槍頭的小伙伴，在吸取試劑時(shí)，很容易不小心將試劑倒吸入移液器，如果發(fā)生這種情況，要及時(shí)用酒精棉球擦去倒吸的試劑，特別是培養(yǎng)基，極易成為細(xì)菌生長(zhǎng)的溫床。一把污染的移液器可以輕松污染小伙伴的所有細(xì)胞，甚至整個(gè)實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞，所以友情推薦有條件的小伙伴在處理細(xì)胞時(shí)一定要使用帶濾芯的槍頭。當(dāng)然即便是使用帶濾芯的槍頭，也要盡量避免試劑倒吸，因?yàn)橄胍?去除倒吸入移液器的試劑非常困難。

　　培養(yǎng)箱作為細(xì)胞培養(yǎng)的場(chǎng)所，也需要小伙伴留心。由于培養(yǎng)箱內(nèi)的溫度和濕度很高，是很適宜細(xì)菌生長(zhǎng)的，所以如果有條件（實(shí)驗(yàn)室有2個(gè)或以上培養(yǎng)箱），好定期用75%酒精擦拭培養(yǎng)箱，及時(shí)定期更換培養(yǎng)箱內(nèi)水槽。

　　那么細(xì)胞如果還是不幸污染了，那又該怎么辦呢？我把細(xì)胞污染分為早期和晚期兩種。早期污染是細(xì)胞狀態(tài)變差，但依舊能保持生長(zhǎng)，顯微鏡下（光鏡）不可見(jiàn)明顯微生物或可見(jiàn)少量微生物，這時(shí)候我們?cè)趽Q液時(shí)建議多用PBS洗幾次，然后用雙抗原液侵潤(rùn)細(xì)胞1-2min，吸去，再加入正常培養(yǎng)基。早期污染只要發(fā)現(xiàn)及時(shí)，處理得當(dāng)，救回來(lái)的可能性還是很大的。晚期污染則是細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯改變，細(xì)胞停止生長(zhǎng)，顯微鏡下可見(jiàn)明顯微生物。這時(shí)候我建議大家及時(shí)清理掉相關(guān)細(xì)胞，以免污染其他細(xì)胞，重新復(fù)蘇更早批次的細(xì)胞。所以大家會(huì)發(fā)現(xiàn)，新細(xì)胞收到后，不應(yīng)急于開(kāi)展實(shí)驗(yàn)，而應(yīng)該先小心培養(yǎng)，凍存1到2個(gè)批次的早期細(xì)胞，然后再開(kāi)展實(shí)驗(yàn)，這樣實(shí)驗(yàn)細(xì)胞一旦出現(xiàn)問(wèn)題，可以有庫(kù)存細(xì)胞保證實(shí)驗(yàn)還能繼續(xù)進(jìn)行。