微生物在使用和傳代過程中容易發(fā)生污染、變異甚至死亡，因而常常造成ATCC菌種的衰退，并有可能使優(yōu)良菌種丟失。ATCC菌種保藏的重要意義就在于盡可能保持其原有性狀和活力的穩(wěn)定，確保菌種不死亡、不變異、不被污染，以達(dá)到便于研究、交換和使用等諸方面的需要。ATCC菌種保藏的方法有哪些呢?

　　傳代保存法

　　有些微生物當(dāng)遇到冷凍或干燥等處理時(shí)，會(huì)很快死亡，因此在這種情況下，只能求助于傳代培養(yǎng)保存法。傳代培養(yǎng)就是要定期地進(jìn)行ATCC菌種轉(zhuǎn)接、培養(yǎng)后再保存，它是zui基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生產(chǎn)菌種的保存。

　　傳代保存時(shí)，培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于zui適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸ATCC菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。

　　一般地，大多數(shù)菌種的保藏溫度以5℃為好，像厭氧菌、霍亂弧菌及部分病原真菌等微生物菌種則可以使用37℃進(jìn)行保存，而蕈類等大型食用菌的ATCC菌種則可以室溫直接保存。

　　傳代培養(yǎng)保存法雖然簡便，但其缺點(diǎn)也很明顯，如：①ATCC菌種管棉塞經(jīng)常容易發(fā)霉;②菌株的遺傳性狀容易發(fā)生變異;③反復(fù)傳代時(shí)，菌株的病原性、形成生理活性物質(zhì)的能力以及形成孢子的能力等均有降低;④需要定期轉(zhuǎn)種，工作量大;⑤雜菌的污染機(jī)會(huì)較多。

　　液體石蠟覆蓋保存法

　　該法較前一種方法保存ATCC菌種的時(shí)間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。此法可防止干燥，并通過限制氧的供給而達(dá)到削弱微生物代謝作用的目的。其具有方法簡便的優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)也適用于不宜冷凍干燥的微生物(如產(chǎn)孢能力低的絲狀菌)的保存，而某些細(xì)菌如固氮菌、乳酸桿菌、明串珠菌、分枝桿菌、紅螺菌及沙門氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克銀漢霉、毛霉、根霉等不宜采用此法進(jìn)行ATCC菌種保藏。

　　懸液保存法

　　即使微生物混懸于適當(dāng)溶液中進(jìn)行保存的方法。常用的有：

　　① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

　　② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。

　　冷凍干燥保存法

　　它的原理是首先將微生物冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分。從菌體中除去大部分水分后，細(xì)胞的生理活動(dòng)就會(huì)停止，因此可以達(dá)到長期維持生命狀態(tài)的目的。該方法適用于絕大多數(shù)微生物ATCC菌種(包括噬菌體和立克次氏體等)的保存。在進(jìn)行冷凍干燥時(shí)，需注意以下幾個(gè)問題：

　　a.冷凍干燥前的培養(yǎng)條件：首先檢驗(yàn)ATCC菌種純度。一般地說，將待保存的微生物在營養(yǎng)豐富且容易增菌的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)為宜;菌齡以達(dá)到對數(shù)生長期為好;若為有芽孢或孢子的微生物，則以芽孢和孢子形成以后進(jìn)行保存為好;菌液濃度以高為好，如細(xì)菌應(yīng)達(dá)到109～1010/ml。

　　b.菌株號碼等的標(biāo)記：可在安瓶外側(cè)標(biāo)記或在安瓶內(nèi)封入標(biāo)簽。

　　c.安瓶的準(zhǔn)備：將安瓶在2%HCl中浸泡過夜，自來水沖洗3次后，蒸餾水刷凈，干燥，塞棉塞，貼標(biāo)簽，干熱滅菌或溫?zé)釡缇螅?0℃恒溫干燥。

　　d.ATCC菌種添加保護(hù)劑：常用的保護(hù)劑有脫脂乳、12%蔗糖、加7.5%葡萄糖的普通肉湯以及加7.5%葡萄糖的血清等等。